Государственная фармакопея Республики Беларусь -
Скачать (прямая ссылка):
Руководство, касающееся минимального рекомендуемого количества образцов, отбираемых для проведения испытания, в зависимости от размера партии, приведено в таблице 2.1.6.-3. При использовании этих рекомендаций следует учитывать объем препарата в контейнере, валидацию метода стерилизации и любые другие особые условия, касающиеся планируемой стерильности продукции.
Наблюдение и интерпретация результатов. Общепринятые микробиологические и биохимические методы в общем случае являются удовлетворительными для идентификации микроорганизмов, выделяемых в ходе испытания на стерильность. Однако, если производитель желает использовать лишь критерий (d) для признания результатов испытания на стерильность недостоверными, может оказаться необходимым использование чувствительных методов классификации для демонстрации идентичности микроорганизма, выделенного при испытании продукции, - микроорганизму, выделенному из материалов и окружающей обстановки. Хотя с помощью рутинных микробиологических и биохимических методов может быть показано, что два изолированных штамма не являются идентичными, эти методы могут быть недостаточно чувствительными и надежными для получения однозначного доказательства того, что два штамма имеют один и тот же источник. Для определения того, что микроорганизмы имеют общее происхождение и клонально связаны, может оказаться необходимым использование более чувствительных тестов, например, молекулярной классификации по гомологии РНК/ДНК.
2.6.2. МИКОБАКТЕРИИ
Если испытуемый образец может содержать микроорганизмы, отличные от микобактерий, его обрабатывают подходящим деконтаминирующим раствором, например, раствором ацетилцистеина и гидроксида натрия или раствором натрия лаурилсульфата.
На каждую из двух подходящих твердых питательных сред (например, среда Лёвенштейна-Йенсена или среда Миддлбрук 7Н10) наносят по 0,2 мл образца.
Эксперимент выполняют в трех повторностях. В подходящую жидкую питательную среду также в трех повторностях вносят по 0,5 мл образца. Все среды инкубируют при 370С в течение 56 дней.
Устанавливают способность среды к обеспечению роста в присутствии испытуемого продукта путем инокуляции подходящего штамма семейства Mycobacterium, например, BCG, и, при необходимости, используют подходящий нейтрализующий агент.
Если в течение первых восьми дней инкубации наблюдается развитие посторонних микроорганизмов, испытание повторяют с одновременным проведением испытания на бактериологическую стерильность.
Продукт выдерживает испытание, если в конце инкубационного периода ни в одной из пробирок не наблюдается роста микобактерий.
2.6.3. ИСПЫТАНИЯ НА ПОСТОРОННИЕ ВИРУСЫ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ КУРИНЫХ ЭМБРИОНОВ
Используют жидкую вакцину или восстанавливают подлежащее испытанию количество вакцины, высушенной из замороженного состояния, применяя указанную на этикетке или другую подходящую жидкость, содержащую в каждом случае соответствующие антибиотики. Если это предписано в частной статье, нейтрализуют моноспецифической антисывороткой. При необходимости разбавляют таким образом, чтобы 0,2 мл смеси содержали 10 доз вакцины. Смесь прививают двум группам по 10 куриных эмбрионов возрастом от 9 до 11 дней, полученных из групп, не содержащих указанных патогенов:
- 0,2 мл в аллантоисную полость каждого из яиц первой группы,
- 0,2 мл на хориоаллантоисную мембрану каждого из яиц второй группы.
В течение 7 дней ежедневно состояние яиц оценивают визуально путем просвечивания. Эмбрионы, погибающие в течение первых 24 часов, не учитывают, считая, что их гибель вызвана неспецифическими причинами: результаты испытания считают достоверными при условии, что не менее 6 эмбрионов из каждой группы выживают в течение более 24 часов после прививки. Все эмбрионы, погибшие более чем через 24 часа после прививки, а также выжившие в течение 7 дней, проверяют на наличие аномалий. Проверяют также хориоаллантоисные мембраны на наличие аномалий, аллантоисные жидкости - на наличие гемагглю-тинирующих агентов, а клетки, отделяемые путем центрифугирования от аллантоисных жидкостей, - на наличие вируса инфекционного бронхита с использованием метода флуоресцирующих антител. Выполняют дополнительный эксперимент с эмбрионами. По отдельности отбирают образцы материала из живых и погибших эмбрионов и прививают каждый из образцов 10 эмбрионам каждым из вышеописанных методов. При этом материал хориоаллантоисных мембран должен наноситься на хориоаллантоисные мембраны, а аллантоисная жидкость должна вводиться в аллантоисную полость. Яйца наблюдают в течение 7 дней и оценивают их состояние в соответствии с вышеприведенными указаниями. В случае, если вакцина приводит к гибели или ненормальному развитию, она не выдерживает испытание.
2.6.4. ИСПЫТАНИЕ НА ВИРУСЫ ЛЕЙКОЗА
Если это предписано в частной статье, вакцину нейтрализуют моноспеци-фической антисывороткой. Вакцину в количестве 10 доз прививают культуре фиб-робластов куриных эмбрионов, поддерживающей рост подгрупп А и В вируса лейкоза. Культуры должны состоять не менее, чем из пяти повторов, площадь каждого из которых составляет не менее 60 см2. Субкультивирование фибробластов производят с интервалами от 3 до 4 дней; весь период поддерживания составляет не менее 9 дней. В конце последнего периода клетки собирают, ресуспендируют, получая концентрацию 107 клеток в миллилитре, и готовят экстракт. Для каждого из экстрактов проводят испытание на связывание комплемента для групп-специфического антигена птичьего лейкоза. Параллельно проводят испытание для контрольных групп с привитым вирусом лейкоза подгрупп А и В. Если обнаруживаются любые свидетельства наличия вируса лейкоза, вакцина не выдерживает испытание. Если результаты не позволяют сделать определенный вывод, проводят дальнейшее субкультивирование фибробластов и продолжают испытание до получения однозначного результата.
